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超滤FAQ

发布日期:2015-04-20  浏览次数:1831  

超滤FAQ


Q:我该如何选择合适的Amicon Ultra装置用于蛋白的浓缩?

A:一般我们推荐选择的超滤管的标称分子量为目标蛋白的1/2或者1/3

Q:Amicon Ultra超滤管可以用于核苷酸纯化与浓缩么?

A:我们推荐Amincon Ultra30kDaMWCO用于基因组和PCR浓缩或纯化时,因为实验数据显示该规格超滤管在核苷酸得率和超滤时间上提供最好的平衡。

Q:如果要用超滤的方法分离两种蛋白,那么这两个蛋白的大小需要相差多少?

A:按照经验,我们推荐两个蛋白的分子量要相差一个数量级(10倍)。

Q:我可以重复使用超滤管么?

A:所有的离心超滤管都是一次性的,不推荐重复使用。

Q:Amicon Ultra超滤管可以用酒精消毒灭菌么?

A:Amicon Ultra装置与70%乙醇是兼容的,但是我们对灭菌处理的具体方法没有做相关的测试,所以无法提供更进一步的参考信息

Q:Amicon Ultra超滤装置是否可以用于高压灭菌?

A:不可以,Amicon Ultra都是采用热封设计,不可以用高压高温灭菌。

Amicon

Q:Amicon Ultra超滤管的膜会因为离心时间过长而变干么?

A:不会,因为Amicon Ultra有死体积,总会有溶液残留在滤管中。

对应的dead volume是:

Amicon 15: 200ul

Amicon 4: 50ul

Amicon 0.5: 10-20ul

Q:Amicon Ultra超滤管是否不含RNA酶?

A:我们不保证超滤管不包含RNA酶,建议您可以用0.1% DEPC37度浸泡2小时,以完全灭活RNA酶。残留的DEPC可以用Milli-Q超纯水洗涤除去。

Q:Amicon Ultra超滤管在用之前需要润湿吗?

A1) 为保证膜的使用性能,超滤管的膜上含有甘油或甘油三酯(10K),大多数情况下,不需要润湿,可直接加样使用。

2) 如果甘油或甘油三酯干扰后续的分析,可以先用buffer或去离子水润湿清洗。

3) 如果干扰还是存在,用0.1N NaOH润湿,然后用buffer或去离子水清洗至中性。

注意:膜一旦润湿,一定要保持膜的湿润状态,防止膜干燥,否则将影响膜的效果

Q:使用超滤膜时,是该将光面还是暗面朝上呢?

A:我们的超滤膜是有光面和暗面之分的,请在使用时,一定要保持光面朝上。

Q:UltracelBiomax超滤膜使用后如何清洗和再生?

A:超滤膜于0.1M NaOH, 100ppm NaOCl溶液中或者0.1-0.5%化学清洁剂中,室温下(25度)浸泡30分钟。浸泡后用去离子或者蒸馏水彻底冲洗。

Q:怎样保存超滤膜?

A:超滤膜可以浸泡在含有10%乙醇或者0.1%叠氮钠的水溶液中保存。

Q:如何推荐超滤管

A: 需要考虑的因素

用途:蛋白或DNA浓缩,去盐,换buffer

分子量大小: 1/21/3原则

体积: 根据体积选择大小

溶剂:极性溶剂?

浓度: 1mg/ml以下

Troubleshooting

Q:我的蛋白流速非常慢,是什么原因?

A: 多种原因可能造成这种结果:

1)蛋白浓度:上样量浓度越高,所需的离心时间越长

2)离心速度:离心速度越低,时间越长。

3)离心温度:低温下,所需离心时间高于常温。

4) 溶液中是否含有去离子剂:大多数去垢剂超过临界微球浓度都会聚集成微球,最后变成较大的分子结构(Triton X-100超过0.01%时,就形成还有140个单体的微球,分子量相当于70-90kDa

Troubleshooting

Q:我的蛋白流穿非常快,没有起到浓缩的作用,是什么原因?

A: 多种原因可能造成这种结果:

1)蛋白浓度:浓度太低

2)离心速度:离心速度超过推荐值

3)样品溶剂:含有超滤膜不兼容的化学成分

4) 膜的截留分子量选择不正确

图1:超滤管起始体积与终体积规格

图2:超滤管选择参考图

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