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康宁cellgro®细胞培养相关产品指南

发布日期:2013-08-08  浏览次数:4439  

康宁cellgro®细胞培养相关产品指南

  • 细胞培养技术
    1. 指的是细胞在体外条件下的生长,在培养的过程中细胞不再形成组织(动物)。培养物是单个细胞或细胞群。细胞在培养时都要生活在人工环境中,由于环境的改变,细胞的移动或受一些其他因素的影响,培养时间加长,传代导致细胞出现单一化型。
  • 细胞类型
    1. 细胞类型根据是否附于支持物上生长的特性,分为贴附型、悬浮型。
    2. 贴附型
    3. 细胞贴附在支持物表面生长,只依赖贴附才能生长的细胞叫做贴附型细胞(Anchorrage-dependent cells)这种现象与细胞分化有关。
    4. 悬浮型
    5. 特点: 不贴附在支持物生长,胞体圆形,在培养液中生长空间大,可长时间的生长,繁殖旺盛便于做细胞代谢研究。S180肉瘤、血液里的白细胞、K562、 HL-60。
  • 贴壁细胞培养基本流程
  • 细胞培养相关产品
    1. 培养基
    2. 培养基(Medium)是供微生物、植物和动物细胞生长和维持用的人工培植的养料,一般都含有:碳水化合物(糖)、氨基酸、无机盐(包括微量元素)、维生素和水。
  • 经典培养基的应用
    1. M199 (Medium 199):
    2. Medium 199 (Mod), 1X, R10-060-CV
    3. 比较古老的,配方复杂的,含有核苷酸,核酸等成分的培养基。最初用于鸡胚肌细胞的培养,还用于各种细胞的维持和病毒生产。
    4. RPMI1640 (Roswell Park Memorial Institute # 1640):
    5. RPMI 1640, 1X w\L-glut, R10-040-CV
    6. RPMI 1641, 1X w\L-glut & HEPES, R10-040-CV
    7. 是McCoy’s 5A的的改进版,还有高浓度的肌醇。广泛用于悬浮细胞的培养。如人类白细胞、骨髓瘤细胞、杂交瘤细胞等血液来源的细胞。
    8. Ham’s F12 (Ham’s Nutrient Mixture F12):
    9. Ham’s F-12 Medium, w\L-glut, R10-080-CV
    10. 含有更多的维生素,肌醇,氨基酸。用于培养大鼠,兔子和鸡胚细胞,还用于中国仓鼠卵巢细胞以及肺细胞的培养。
  • 培养基的保存及运输
    1. ● 干粉:3年
    2. ● 液体:12—18个月
    3. ● 液体基础培养基都必须在2—8℃,避光保存,不能冷冻
    4. ● 干粉和液体培养基可在室温情况下运输
  • 细胞培养添加剂
    1. 谷氨酰胺——能量来源
    2. L-GLUTAMMINE, powder, R61-030-RM
    3. ►L-谷氨酰胺是一种氨基酸,细胞的重要能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。
    4. ►L-谷氨酰胺不稳定,在中性的水溶液中会自发降解;降解产物对细胞有毒性(对干细胞、原代细胞影响尤其大)。
    5. ►解决方案:
    6. √选择不含谷氨酰胺的培养基,自己添加
    7. √选择稳定的谷氨酰胺替代物
    1. glutaGRO:稳定的谷氨酰胺替代物
    2. glutaGRO Supplement, R25-015-CI
    3. ►glutaGROTM是由丙氨酸和L-谷氨酰胺缩合形成的二肽,稳定性高
    4. ►可在室温下保存,2年稳定(谷氨酰胺需冷冻保存),使用更方便
    5. ►不易降解,不产生有毒氨,更利于细胞生长。
    6. ►Gibco GlutaMAX的完全替代
    1. 丙酮酸(Sodium Pyruvate)——能量来源
    2. Sodium Pyruvate Solution 100 mM (100X), liquid, R25-000-CI
    3. ►丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源
    4. ►葡萄糖不足的时候,细胞可以代谢丙酮酸钠
    1. 非必须氨基酸
    2. 根据细胞而定,非必须氨基酸 R25-025-CI
  • 平衡盐溶液
    1. ►平衡盐溶液主要是由无机盐、葡萄糖组成;
    2. ►它的作用是维持细胞渗透压平衡,保持pH稳定及提供简单的营养;
    3. ►用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配置其他试剂等
    4. ● PBS磷酸盐缓冲液
    5. PBS 1X w\o Ca & Mg, R21-040-CV
    6. ● DPBS (Dulbecco’s Phosphate-Buffered Salines)
    7. DPBS 1X w\o Ca & Mg, R21-031-CV
    8. ● Earle’s 平衡盐
    9. ● Hank’s 平衡盐 (HBSS)
    10. HBSS, 1X, w\ Ca &Mg, R21-020-CV
  • 培养基中的pH缓冲剂
    1. 碳酸氢钠
    2. ►多数培养基利用碳酸氢钠进行缓冲
    3. ►碳酸氢钠的缓冲需要二氧化碳
    4. 高碳酸氢钠(1.5-3.7g\L)需要5—10% CO2
    5. 低碳酸氢钠(0.35g\L)不需要二氧化碳孵箱
    6. ►干粉培养基在配置时单独添加
    1. HEPES
    2. HEPES Buffer 1M Soltn, R25-060-CI
    3. ►氢离子缓冲剂,其作用不依赖于二氧化碳
    4. ►在一定范围内对细胞无毒性作用。它是一种氢离子缓冲剂,能较长时间控制恒定的pH范围,保证细胞的良好生长
    5. ►非必需,根据细胞和实验要求选择
    1. 血清
    2. 血液凝固后,在血浆中除去纤维蛋白分离出的淡黄色透明液体
    3. ►提供基本营养物质:氨基酸、维生素、无机盐、脂类物质、核酸衍生物等,是细胞生长必须的物质
    4. ►提供激素和各种生长因子:胰岛素、肾上腺皮质激素(氢化可的松、地塞米松)、类固醇激素(雌二醇、睾酮、孕酮)等。生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。
    5. ►提供结合蛋白:结合蛋白作用是携带重要的低分子量物质,如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等,转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用。
    6. ►促进细胞贴壁
  • 常见动物血清的种类
    1. 胎牛血清(FBS)
    2. 康宁cellgro FBS
    3. ►澳洲胎牛血清
    4. Fetal Bovine Serum, Australia origin R35-076-CV
    5. 澳洲——“最干净的大陆”
    6. 高端产品
    7. ►南美(乌拉圭)胎牛血清
    8. FBS, Uruguay origin, 35-010-CV
    9. 中端价格
    10. 品质保证
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